Q1. 세포증식 측정에 MTT, XTT, MTS라고 하는 시약 (Tetrazolium salt)이 사용되는데 다카라의 Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System의 차이가 무엇인가요?
기본적인 실험원리는 동일하지만, 각 Tetrazolium salt에 의해 생성된 formazan (색소)의 물에 대한 용해도가 큰 차이를 나타냅니다. MTT는 물에 녹지 않는 formazan 을 형성하여,
계면 활성제나 유기용매로 formazan을 녹이는 과정이 필요합니다. (용매를 교환하는 과정에서 세포가 떨어져, 부정확한 결과를 얻을 수 있습니다.)
또한, XTT와 MTS는 수용성의 formazan을 생성하지만 Premix WST-1에 비해 용해도가 낮습니다. 따라서 다른 Tetrazolium salt에 비해 WST-1이 감도가 높고,
측정 범위가 넓은 장점을 가집니다.
Q2. WST-1과 비슷하게 수용성 시약으로 세포의 증식을 측정하는 AlamarBlue라는 제품이 있는데, 차이점은 무엇인가요?
AlamarBlue는 흡광도와 형광방식으로 세포의 증식이 측정가능합니다. 하지만 WST-1과 비슷한 감도를 가지기 위해서는 흡광도 방식은 불가능하며, 형광방식으로만 사용 가능합니다.
Q3. 세포를 접종하고 난 뒤, Premix WST-1을 첨가할 때까지 전배양 시간은 어느 정도 필요인가요?
세포의 종류와 상태 (증식기, 정지기 등)와 실험 목적에 따라 다르지만, 일반적으로 overnight 배양 (16 hr)으로 충분하다고 판단됩니다.
Q4. Formazan 색소의 발색을 측정하는 plate reader의 파장 얼마입니까?
420~480 nm 사이가 적당합니다. 단, 최대 흡광도는 약 440 nm이므로, 그 범위를 벗어나면 흡광도 값이 저하됩니다.
Q5. 죽은 세포로부터 분비된 LDH (lactate dehydrogenase)로 인해 WST-1 측정에 영향은 없나요?
