Q1. DNA tranfection reagent - TransIT-X2®, TransIT®-2020, TransIT®-LT1 의 차이점은 무엇인가요?
TransIT-X2®,
TransIT®-2020,
TransIT®-LT1 제품 모두 고효율의 적용성 높은 transfection 으로 아래와 같은 차이점이 있습니다.
Features |
TransIT-X2® Dynamic Delivery System |
TransIT®-2020 Transfection Reagent |
TransIT®-LT1 Transfection Reagent |
Nucleic Acid Transfected |
DNA, siRNA, miRNA, pre-miRNA |
DNA only |
DNA only |
Low Cellular Toxicity |
*****
(Minimal Toxicity) |
*****
(Minimal Toxicity) |
*****
(Exceptionally Low Toxicity) |
High knockdown |
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Not suitable for this application‡ |
Not suitable for this application‡ |
Co-transfection of DNA and siRNA |
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Not suitable for this application |
Not suitable for this application |
Animal Origin Free |
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|
No |
‡ Target gene knockdown can be accomplished with this reagent via shRNA encoding plasmid DNA delivery. This reagent is not optimal for the delivery
of smaller nucleic acids such as siRNA/miRNA.
Q2. TransIT-X2®를 reverse transfection 에 사용할 수 있나요?
Q3. TransIT-X2®를 siRNA 또는 miRNA 에 적용할 수 있나요?
네, 가능합니다.
TransIT-X2®은 포유류세포에 siRNA, miRNA, pre-miRNA와 같은 small nucleic acid의 transfection에 사용할 수 있습니다. siRNA delivery를
위한 자세한 내용은
제품매뉴얼 (PDF)
를 참고 바랍니다.
Q4. TransIT-X2®를 plasmid DNA와 siRNA의 co-transfection에 적용할 수 있나요?
네, 가능합니다.
TransIT-X2®은 DNA와 siRNA를 동시에 transfection 하는 목적으로 사용할 수 있습니다. Cotransfection을 위한 자세한 내용은
제품매뉴얼 (PDF)
를 참고 바랍니다.
Q5. TransIT-X2® 1.5 ㎖ 은 몇 회 사용분인가요?
실험마다 사용되는 세포 타입, 플레이트 형태 등에 따라
TransIT-X2® 와 핵산의 최적의 사용 비율이 달라질 수 있습니다. 예를 들면,
TransIT-X2® : 핵산 = 3:1 비율로 사용하는 경우 (예.
TransIT-X2® 3 ㎕ 당 DNA 1 ㎍),
TransIT-X2® 1.5㎖ 은
약 500 wells (12-well plate 기준)을 사용할 수 있습니다.
TransIT-X2® 제품상세정보 보기
Q6. TransIT-X2® 와 핵산 (DNA and/or siRNA)의 transfection 복합체 형성 시 어떤 무혈청(serum-free) 배지를 사용해야 하나요?
최적인 실험결과를 위해, Opti-MEM® I Reduced-Serum Medium 을 추천합니다. 몇몇 serum free 배지에는 heparin, polydextran sulfate 등의
다가 음이온 (polyanion)이 포함되어 있어 transfection 복합체의 형성을 방해할 수 있어 추천하지 않습니다.
Q7. Transfection에 사용되는 TransIT-X2® 와 핵산의 양은 얼마인가요?
TransIT-X2® 시약과 핵산의 양은 culture well/vessel 면적에 따라 달라 질 수 있습니다. 핵산의 종류에 따라 아래의 조건을 우선 검토하길 추천드립니다.
- DNA transfection: 6-well plate의 well 당 TransIT-X2® 7.5 ㎕와 DNA 2.5 ㎍ (3:1 비율; ㎕ of reagent/㎍ of DNA) 조건을
우선 검토하되, 최적의 결과를 위해 세포 타입, passage 정도, 세포 농도, incubation 시간 등에 따라 DNA 1 ㎍ 당 TransIT-X2® 2-6 ㎕의 비율 중
적절한 조건을 검토할 것을 추천합니다.
- siRNA/miRNA/pre-miRNA transfection: 초기 조건으로 6-well plate의 well 당 TransIT-X2® 7.5 ㎕와 small RNA 최종 농도
25 nM을 초기 조건으로 6-well plate의 well 당 TransIT-X2® 을 다양하게 검토할 것을 추천합니다.
- DNA와 siRNA co-transfection: TransIT-X2® 7.5 ㎕, DNA 2.5 ㎍, siRNA 25 nM을 초기 조건으로 시작하여
DNA 1 ㎍ 당 TransIT-X2® 2-6 ㎕의 비율 중 적절한 조건을 검토할 것을 추천합니다.
주의: 사용 전 반드시
제품매뉴얼 (PDF) 을 확인 후, 실험에 적절한 조건을 검토하시기 바랍니다.
Q8. 항생제가 transfection을 저해하나요?
Kanamycin과 같은 양이온성 항생제 중 일부는 transfection 복합체 형성을 방해할 수 있므로, transfection 복합체 형성과정에는 항생제를 사용하지 않는 것을
추천합니다. 하지만, transfection 복합체를 형성한 이후에는 낮은 수준의 항생제 (예. 100X penicillin/streptomycin solution을 최종 농도 0.1-1X 로 희석한 경우 등)가
포함된 배양배지에서 키운 세포를 이용한 transfection을 진행할 수 있습니다.
Q9. 얼마나 오래 세포와 TransIT-X2®: 핵산 transfection 복합체를 incubation 해도 되나요?
TransIT-X2®: 핵산 transfection 복합체를 별도로 제거해줄 필요는 없습니다. 혹시 배지교체가 필요하다면, 복합체가 충분히 세포내 도입될 수
있도록 세포에 복합체를 넣은 후, 최소한 4시간은 그냥 두는 것을 추천합니다.
Q10. 세포 농도 (%confluence)와 passage 수가 transfection에 중요한 고려요소인가요?
네, 적절한 세포농도와 transfection 시의 confluence (≥ 80%) 는 대부분의 세포에 TransIT-X2® 적용 시 성공적인 transfection 의 필수요소입니다.
Passage 횟수가 많으면 세포 형태, 분열률과 같은 세포특성이 변화할 수 있으므로 passage 횟수를 모니터링 하는 것도 중요합니다.
Q11. Transfection 효율을 확인하는 방법이 있나요?
Q12. TransIT-siQUEST® Reagent 와 TransIT-TKO® Reagent 의 차이는 무엇인가요?
두 제품은 확연히 다른 조성으로 cell line에 따라 각기 다른 trasnsfection 프로파일을 가지며, 특정 cell line에 대해 특정시약이 더 적합할 수 있습니다
(
실험자료 PDF).
TransIT-siQUEST®는
siRNA 도입을 위해 고안되었고,
TransIT-TKO® 는 plasmid DNA와 siRNA co-transfection에도 이용할 수 있습니다.
Q13. siRNA 희석은 어떻게 하나요?
RNase-free water로 만든 50 mM Tris buffer (100 mM NaCl 포함, pH 7.5)를 사용하며, 특히 낮은 농도의 siRNA duplex는 변성을 유발할 가능성이 있는 water는 사용하지 않습니다.
siRNA와 함께 제공되는 annealing buffer에 희석하셔도 됩니다.
Q14. TransIT-siQUEST® Reagent를 이용하여 2가지 다른 siRNA duplex도 transfection 할 수 있나요?
네, TransIT-siQUEST® 로 한번에 2가지 siRNA duplex를 transfection 할 수 있습니다. Well 당 사용하는 TransIT-siQUEST® 의 양은
조정할 필요 없지만, siRNA의 총 농도는 10-50 nM 범위내에서 조정해야 하는 경우가 있습니다.
