High Fidelity, Full-length를 모두 가진 Perfect cDNA!
Cloning, PCR, qPCR 실험의 기본, 고품질의 cDNA 합성
Perfect cDNA 합성으로 실험의 품격을 높이세요.
일반적인 cDNA 합성 과정
정확도 높은 Full-Length cDNA 합성을 위해 충족해야 할 조건
- 다양한 샘플로부터 추출한 고품질 RNA (높은 RIN 값)
- gDNA 오염 없는 고순도 RNA
- 빠르고, 간편한 RNA 추출
- 역전사 과정 중 Error 없는 정확한 cDNA
- 뛰어난 신장력을 이용한 Long cDNA 합성
- 편향성 (Bias) 없는 cDNA
- 다양한 cDNA 합성 저해 요소 극복
다양한 샘플에서 gDNA 오염 없는 고품질 RNA 추출을 위한 최고의 선택
- 다양한 샘플에서 높은 RIN (RNA Integrity Number) 값*1의 RNA 추출
- Full-length cDNA 합성을 위한 높은 Long RNA 추출 효율
- gDNA Eraser Column으로 1분만에 gDNA 제거
- 최적화된 Lysis buffer 사용: 동/식물 세포, 조직, 혈액*2, 박테리아*2, 효모*2 등 적용 가능
*1 RNA의 품질을 나타내는 척도로, 10에 가까울수록 degradation 되지 않은 intact RNA를 의미
*2 별도의 Protocol 사용
1. 높은 RIN값의 고품질 RNA 추출
그림 1. HL60 세포로부터 추출한 RNA의 RIN (RNA Integrity Number) 값 비교
TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit를 이용하여
추출한 RNA가 타사 제품을 이용하여 추출한 RNA 때 보다
높은 RIN값을 가지는 것을 확인하였다.
2. Full-length cDNA 합성을 위한 뛰어난 Long RNA 추출 효율
그림 2. Long RNA 추출 효율 비교
각 제조사의 방법에 따라 Mouse heart RNA를 추출하여 각각 12 kb, 13 kb의 유전자를 RT-PCR 하였다.
그 결과, TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit로 추출한 RNA를 이용하였을 때 타사 대비 높은 효율로 12 kb, 13 kb 유전자가 증폭됨을 확인하였다.
3. 단 1분, 고순도 RNA를 위한 gDNA 제거
그림 3. Spin column을 이용한 간단한 gDNA 제거
제품 내에 포함된 gDNA Eraser Spin Column을 이용하여 효과적으로 genomic DNA를 제거할 수 있다.
또한 gDNA Eraser Spin Column으로 소량의 gDNA를 추출할 수 있음을 확인하였다.
High Fidelity, Full-Length cDNA 합성 kit
PrimeScript™ Reverse Transcriptase 시리즈
| - 높은 정확도 |
: 역전사과정에서 발생하는 error 발생 최소화 |
| - 뛰어난 신장력 |
: Full-length cDNA 합성에 최적 (Up to 13 kb) |
| - 탁월한 증폭능력 |
: RNA 고차구조, GC-rich 서열도 효율적인 역전사 가능 |
1. Error 없는 cDNA 합성을 위한 높은 정확도
역전사반응은 다양한 실험의 기초가 되지만, 그 정확도의 중요성은 간과하기 쉽다.
다카라의 정확도 높은 역전사 효소 PrimeScript™ RTase와 타사 역전사 효소를 이용하여 역전사 효소간의 정확
도 (fidelity)를 비교한 결과, PrimeScript™를 이용한 역전사 반응의 정확성이 가장 높은 것으로 확인되었다.
표 1. 역전사효소의 정확도 비교
인간 태반 유래 total RNA 100 ng을 Oligo dT primer로 역전사 반응한 후, 얻은 cDNA (RNA 5 ng에 해당)을 주형으로
TFR유전자 500 bp를 High Fidelity PCR 효소인 PrimeSTAR HS로 증폭하였다. 증폭산물을 sequencing 하여 총 염기 수 (약
20만 염기) 대비 error 염기 수 비교
2. 42℃ 반응온도에서도 뛰어난 신장력: 최대 13.5kb 합성 확인
그림 4. PrimeScript™ RTase의 뛰어난 신장력
사람 심장유래 혹은 HL60 세포 유래의 total RNA (100 ng 또는 1 ㎍ / 20 ㎕ 반응계)를 주형으로 PrimeScript™ RTase와
Oligo dT primer를 이용하여 cDNA를 합성 (42°C, 30분)하였다. 합성된 cDNA를 주형으로 0.5~13.5 kb의 타겟을 PCR
(25 ㎕ 반응계)로 증폭한 결과, 0.5~13.5 kb의 증폭사이즈에 걸쳐 PrimeScript™ RTase의 신장성이 매우 양호함을 확인하였다.
3. 견고한 고차구조의 RNA도 42℃로 역전사 가능
그림 5. 고차구조인 RNA의 역전사 효율 비교
견고한 고차구조를 가진 28S ribosomal RNA를 타겟으로 PrimeScript™ RTase 및 A사 역전사 효소로 cDNA를 합성한 후,
동일한 조건하에 PCR 증폭하여 cDNA 합성효율을 비교하였다. 견고한 구조를 가지는 RNA에 대해서도 PrimeScript™ RTase
가 가장 뛰어난 감도와 증폭 효율을 나타내었고, cDNA 합성량도 42°C로 반응한 PrimeScript™ RTase가 가장 많았다.
4. Full length cDNA 합성을 위한 다양한 PrimeScript™ RTase 제품
Perfect cDNA 합성을 위한 서포터즈
