À¯ÀüÀÚ ÆíÁýµÈ hiPSCÀÇ ´ÜÀϼ¼Æ÷ È®´ë¹è¾çÀ» À§ÇÑ
Cellartis¢ç DEF-CS¢â Culture System
ÃÖ±Ù À¯ÀüÀÚ ÆíÁý ±â¼úÀÇ ¹ßÀüÀ¸·Î ¼¼Æ÷³ª ´Ù¾çÇÑ À¯±âüÀÇ ¸ñÀû À¯ÀüÀÚ¸¦ º¯ÇüÇϰųª, µµÀÔÇÏ´Â °ÍÀÌ °¡´ÉÇØÁ³´Ù. human induced Pluripotent Stem Cells (hiPSC)¿¡µµ ÀÌ·¯ÇÑ À¯ÀüÀÚÆíÁý
±â¼úÀÌ Àû¿ëµÇ¾î Àΰ£ Áúº´ ¸ðµ¨ Á¦ÀÛ ¹× À¯ÀüÀû º¯È·Î ÀÎÇÑ ±â´É º¯È ¿¬±¸, Àç»ýÀÇÇÐµî ´Ù¾çÇÑ ºÐ¾ß¿¡ Àû¿ëÇÏ°í ÀÖ´Ù.
ÀÌ·¯ÇÑ ¿¬±¸¸¦ À§Çؼ´Â À¯ÀüÀÚ ÆíÁýµÈ hiPSC¸¦ È¿À²ÀûÀ¸·Î ´ÜÀϼ¼Æ÷·Î ¹è¾ç (Single Cell Cloning)ÇÏ¿©, ¿øÇÏ´Â À¯ÀüÀÚ°¡ Á¤È®ÇÏ°Ô ÆíÁýµÈ ¼¼Æ÷¸¦ ¼±º°ÇÏ´Â °úÁ¤ÀÌ ²À ÇÊ¿äÇÏ´Ù.
±×·¯³ª on-feeder ¶Ç´Â colonyÇüÅ·Π¹è¾çµÈ hiPSC´Â ´ÜÀϼ¼Æ÷·Î ¹è¾ç ½Ã ¼ºÀå°ú »ýÁ¸ °ü·Ã signalÀÌ °¨¼ÒµÇ¾î »ýÁ¸·ü (cell viability)ÀÌ ¸Å¿ì ³·À¸¸ç, »ýÁ¸ÇÑ ¼¼Æ÷´Â ¹ÌºÐÈ À¯Áö°¡ ¾î·Æ±â ¶§¹®¿¡ ¿¬±¸¿¡ ¾î·Á¿òÀ» °Þ°í ÀÖ´Ù.
Takara Bio¿¡¼´Â DEF-CS¢â Culture SystemÀ» ÅëÇØ hiPSC¸¦ feeder-free, non-colony ÇüÅ (monolayer)·Î ¹è¾çÇÏ¿©, on-feeder ¹× colony ¹è¾ç¿¡¼ ¹ß»ýÇÏ´Â ¹®Á¦Á¡À» ÇØ°áÇÏ¿´´Ù.
À̸¦ ÅëÇØ, ´ÜÀϼ¼Æ÷¸¦ È¿°úÀûÀ¸·Î ¹è¾çÇÏ¿©, ¼¼Æ÷ÀÇ »ýÁ¸·üÀ» ȹ±âÀûÀ¸·Î Áõ°¡½ÃÅ°°í, °·ÂÇÏ°Ô ¹ÌºÐȸ¦ À¯ÁöÇÔÀ¸·Î½á hiPSCÀÇ À¯ÀüÀÚ ÆíÁý ½ÇÇèÀÇ È¿À²À» Áõ°¡½Ãų »Ó¸¸ ¾Æ´Ï¶ó,
½ÇÇè ½Ã°£µµ ´ëÆø ´ÜÃàÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.
hiPSCÀÇ À¯ÀüÀÚ ÆíÁý ½Ã, ´ÜÀϼ¼Æ÷ ¹è¾ç (Single cell Cloning)ÀÌ ÇÊ¿äÇÑ ÀÌÀ¯?
À¯ÀüÀÚ ÆíÁý È¿À²Àº 100%°¡ ¾Æ´Ï±â ¶§¹®¿¡, ½ÇÁ¦ À¯ÀüÀÚ°¡ ÆíÁýµÈ ¼¼Æ÷¸¦ ¼±º°ÇÏ´Â °úÁ¤ÀÌ ÇÊ¿äÇÏ´Ù.
1. ¸ñÀû À¯ÀüÀÚÀÇ À¯ÀüÀÚ ÆíÁý ¿©ºÎ È®ÀÎ ÇÊ¿ä (monoallelic, biallelic)
2. ¸ñÀû À¯ÀüÀÚ°¡ ÆíÁýµÈ ¼¼Æ÷¸¸ ¼±ÅÃÇÏ¿© ½ÇÇè
3. ÆíÁýµÈ ¼¼Æ÷ Áß¿¡¼µµ È¿°úÀûÀÎ Knock-out ¼¼Æ÷ ¼±º° ÇÊ¿ä
1. ´ÜÀϼ¼Æ÷ ºÐ¸®½Ã, limiting dilution (Clone Çü¼º È¿À² Áõ°¡)
ChiPSC cell line |
Isolation method |
Single clones |
Double clones |
Total clones (proportion) |
Total clones (%) |
ChiPSC 18 |
FACS |
52 |
0 |
52/96 |
54% |
ChiPSC 18 |
Limiting dilution |
46 |
12 |
58/58 |
100% |
ChiPSC 22 |
Limiting dilution |
39 |
15 |
54/55 |
98% |
2. ¼¼Æ÷´Â ¼ºÀå (proliferation)»óÅÂÀÇ hiPSC¸¦ »ç¿ë: ³·Àº ¹Ðµµ(0.8-1.5 x 105 cells/cm2)¿¡¼ ¹è¾çµÈ hiPSC¸¦ »ç¿ë
(¾Æ·¡ À̹ÌÁö ÂüÁ¶)
3. ÃÖÁ¾ Èñ¼® ¼¼Æ÷ ³óµµ¸¦ 1 cell/well ¶Ç´Â 0.5 cell/well·Î °è»ê
- ¿¹) 50~100 cells/10 §¢·Î Èñ¼® ÈÄ, 100 §¡ ¾¿ 96 well plate¿¡ ÷°¡
4. Transfection ¶Ç´Â À¯ÀüÀÚ ÆíÁý µÈ ¼¼Æ÷ÀÇ ¾ÈÁ¤È¸¦ À§ÇØ ÃÖ¼Ò 5ÀÏ ÀÌ»ó ¹è¾ç ÈÄ ´ÜÀϼ¼Æ÷·Î ¹è¾ç