당사에서 판매하는 his-tagged protein 정제를 위한 제품은 단백질 정제 과정에서 주로 사용되는 다양한 첨가제에 대한 호환성을 가지고 있다. 각 첨가제에 대한 제품 별 호환성을 아래의 표에서 확인할 수 있다

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• His60 Nickel resin reagent 시약 호환성 보러가기
• TALON^® cobalt resin reagent 시약 호환성 보러가기

■ Capturem™ nickel column 시약 호환성
Capturem™ his-tagged protein purification column은 높은 capacity의 Ni-NTA membrane을 사용해 다양한 조건에서 고농도의 recombinant protein을 빠르게 정제한다. 이 column은 xTractor Buffer (Code 635656) (miniprep과 maxiprep의 경우 제품 내 포함되어 있음)와 이외 다양한 조성의 lysis buffer를 같이 사용할 수 있다. 또한 native 또는 denaturing 조건이나 첨가제 (e.g. EDTA, βME, TCEP, DTT 등)의 존재 하에서도 일관된 정제 결과를 보인다.

Capturem™ nickel column과 호환되는 reagent

Reagent	Compatibility*
MOPS	200 mM
HEPES	200 mM
Tris	200 mM
EDTA	10 mM
Beta-mercaptoethanol	30 mM
DTT	10 mM
TCEP	5 mM
Guanidine-HCl	6 M
Urea	8 M
Nonionic detergent (Triton X-100)	2%
Nonionic detergent (Tween 20)	2%
Anionic detergent (SDS)	1%
Arginine	500 mM
Glycine	100 mM
Histidine	20 mM
Sodium chloride	2 M
Imidazole	40 mM
Glycerol	10%

*현재까지 테스트된 호환 가능한 최대 농도.

■ His60 Nickel resin reagent 시약 호환성
His60 Ni resin은 높은 capacity의 Ni-IDA resin으로, one step으로 native 와 denaturing 조건의 his-tagged protein을 모두 정제할 수 있다. 이 resin은 다양한 denaturant 및 detergent와 같이 사용 가능하며 (전체적인 시약 호환성은 제품 사용자 매뉴얼 참고), 정제된 recombinant his-tagged protein은 300 mM imidazole을 첨가하거나 pH를 낮추어 elution 할 수 있다.

His60 Nickel resin과 호환되는 reagent

Reagent	Acceptable Concentration
Beta-mercaptoethanola	20 mM (with caution)
CaCl2	5 mM
CHAPSb,c	1% (with caution)
DTT (dithiothreitol)d	1 mM (with caution)
Ethanole	20%
Glycerol	20%
Guanidine hydrochloridef	6 M
HEPESg	Up to 100 mM (with caution)
Histidineh	- 20 mM to inhibit nonspecific binding - Up to 100 mM to elute his-tagged proteins
MgCl2	4 M
MOPSg	Up to 100 mM (with caution)
NP-40b,i	2%
SDSb,c	1% (with caution)
Sodium acetate	Up to 100 mM (with caution)
Sodium phosphate	Up to 50 mM
Trisj	Up to 50 mM (with caution)
Triton-X 100b,i	1%
Tween 20	2%
Ureaf	8 M

^a Beta-mercaptoethanol을 포함한 buffer를 사용하는 경우 equilibration 후 바로 resin을 사용한다. 그렇지 않은 경우 resin의 색이 노란 색으로 변색될 수 있다. 이 buffer로는 resin의 보관이 불가능하다.
^b 이러한 detergent는 버퍼를 교환해도 쉽게 제거되지 않는다.
^c CHAPS (3-[(3-Cholamidopropyl)-dimethylammonio]-1-propane-sulfonate), SDS (sodium dodecyl sulfate), sarkosyl 같은 ionic detergent는 최대 1% 까지만 적용 가능하다. 그러나 전하를 띄는 특성으로 인해 낮은 농도에서도 단백질 결합에 방해가 될 수 있다.
^d DTT는 환원제이기 때문에 농도가 낮으면 His60 Ni Superflow resin의 metal ion을 탈락시킬 수 있다. 단백질을 정제하기에는 충분한 양이 남아있으면 사용할 수 있으나 주의해 사용해야 한다. 최소 column volume의 20배 이상으로 wash를 진행하고 이때 저농도의 imidazole (40 mM)을 사용해 탈락된 metal ion을 wash한다.
^e Ethanol은 단백질을 침전시켜 수율을 감소시키고 column을 막히게 할 수 있다.
^f 고농도에서는 일반적으로 단백질이 unfolding되고, column에서 혹은 elution 후 refolding 된다 (단백질에 따라 다름).
^g Amine group이 이 buffer에 있는 경우 Ni2+ ions과 상호작용해서 resin의 binding capacity를 감소시킬 수 있다.
^h Resin에 있는 His60 Ni와 his-tag에 있는 histidine 잔기와의 결합에 경쟁하여 저해한다.
ⁱ 280 nm 파장대에서 높은 흡광도를 가진다.
^j tris는 금속 이온과 약하게 상호작용하여 resin의 capacity를 감소시킨다.

His60 Nickel resin과 호환되지 않는 reagent

아래의 시약은 어떤 농도로도 resin에 적용이 불가능하다

Arginine, glycine, glutamine EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), EGTA (ethylene glycol tetra acetic acid), and PEI 주의: 이러한 킬레이트 시약을 사용하면 resin에서 metal 이온을 탈락시켜 단백질을 elution 시키거나 resin의 색을 변화시킬 수 있다. DTE (dithioerythritol)

■ TALON^® cobalt resin reagent 시약 호환성
TALON^® purification resin은 his-tagged protein을 매우 높은 순도로 native 혹은 denaturing 조건 상관없이 bacterial, mammalian, yeast, baculovirus에 감염된 cell 등에서 정제할 수 있다. TALON^®은 cobalt가 들어간 IMAC (Immobilized Metal Affinity Chromatography) resin으로 nickel이 들어간 resin 보다도 더욱 특이적으로 his-tagged 단백질과 결합한다. 따라서 TALON^® resin은 가장 높은 순도의 his-tagged protein을 정제할 수 있다. 또한 각각의 cobalt 이온은 4개의 부위에서 resin과 결합하기 때문에 금속 이온의 탈락이 매우 적다.

TALON^® cobalt resin과 호환되는 reagent

Reagent	Acceptable Concentration
Beta-mercaptoethanola	10 mM (with caution)
CHAPSb	1% (with caution)
Ethanolc	30%
Ethylene glycol	30%
HEPES	50 mM
Glycerol	20%
Guanidine hydrochloridea	6 mM
Imidazoled	200 mM at pH 7.0-8.0, for elution
KCl	500 mM
MES	20 mM
MOPS	50 mM
NaCl	1.0 M
NP-40	1%
SDSb	1% with caution
Trise	50 mM
Triton-X 100	<1%
Urea	8 M

^a Beta-mercaptoethanol을 포함한 buffer를 사용하는 경우 equilibration 후 바로 resin을 사용한다. 그렇지 않은 경우 resin의 색이 노란 색으로 약하게 변색될 수 있다. 이러한 buffer로는 resin의 보관이 불가능하다.
^b CHAPS (3-[(3-Cholamidopropyl)-dimethylammonio]-1-propane-sulfonate), SDS (sodium dodecyl sulfate), sarkosyl같은 ionic detergent는 최대 1% 까지만 적용 가능하다. 그러나 전하를 띄는 특성으로 인해 낮은 농도에서도 단백질 결합에 방해가 될 수 있다.
^c Ethanol은 단백질을 침전시켜 수율을 감소시키고 column을 막히게 할 수 있다.
^d Imidazole은 his-tagged protein의 side chain과 고정되어 있는 금속이온과의 결합에 경쟁하여 저해하기 때문에 단백질을 로딩할 때 5~10 mM 이상의 농도로 사용할 수 없다.
^e Tris는 금속 이온과 약하게 상호작용하여 resin의 capacity를 감소시킨다.

TALON^® cobalt resin과 호환되 않는 reagent

아래의 시약은 어떤 농도로도 resin에 적용이 불가능하다

DTT (dithiothreitol) and DTE (dithioerythritol) 주의: 강한 환원제를 사용하는 경우 cobalt 금속 이온과 resin의 결합을 방해한다. EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), EGTA (ethylene glycol tetraacetic acid), PEI 주의: EDTA를 사용할 수는 있으나 TALON® Resin에 적용하기 전에 gel filtration을 통해 샘플에서 제거해야 한다.