Cellartis^® iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System (Code Y30055)은 functional한 hiPSC 유래 hepatocyte를 3주만에 제작하기 위한 complete solution을 제공합니다. 이 제품으로 hiPSC (human induced pluripotent stem cell)에서 분화된 hepatocyte는 drug-metabolizing enzyme이나 transporter를 충분히 발현하고 있고, 이를 배양 중 안정적으로 유지하기 때문에 primary hepatocyte의 대체제로 사용되고 있습니다. 또한 이런 hiPSC 유래 hepatocyte는 사람들 간의 metabolic diversity를 정확하게 반영할 수 있다는 특징이 있습니다.

아래의 FAQ 이외 제품에 대해 관련된 내용은 제품페이지 및 사용자매뉴얼에서 확인하실 수 있습니다.


Q1. Cellartis^® iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System (Code Y30055)는 Cellartis^® Definitive Endoderm Diff Kit with DEF-CS (Code Y30035) + Cellartis^® Hepatocyte Diff Kit (Code Y30050) 제품을 각각 구매하는 것과 어떻게 다른가요?
Cellartis^® iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System (Code Y30055)은 Cellartis^® Definitive Endoderm Diff Kit with DEF-CS (Code Y30035)와 Cellartis^® Hepatocyte Diff Kit (Code Y30050)를 각각 구매하는 것과 같은 구성품을 가지고 있습니다.

Q2. 어떤 종류의 pluripotent stem cell을 적용할 수 있나요?
이 제품은 당사에서 보유하고 있는 30종 이상의 모든 pluripotent stem cell line에서 적용 가능했습니다. 당사에서는 판매하고 있는 hiPSC를 제품이외에도 연구실에서 보유한 이외의 pluripotent stem cell 역시 적용이 가능합니다.

Q3. DEF-CS culture medium을 추가로 구매해야 하나요?
필요하지 않습니다. 이 제품에는 보유하신 hPS cell line을 DEF-CS에 적응시키고 분화 전까지 확대배양하기에 충분한 양의 DEF-CS 배지가 Cellartis DEF-CS 100 Culture System에 포함되어 있습니다.

Q4. 이 제품으로 얻을 수 있는 definitive endoderm의 최종 purity는 얼마인가요?
7일차에 평균 97%의 세포가 Sox17-positive입니다.

Q5. 이 제품으로 얻을 수 있는 hiPSC 유래 hepatocyte의 최종 purity는 얼마인가요?
21차에 평균 94%의 세포가 HNF4α-positive입니다.

번외. HNF4α-negative의 6% 세포는 어떤 세포인가요?
이 세포의 subpopulation은 다른 endodermal 세포들의 mixture로 추정됩니다. 다만 정확한 구성은 알려져 있지 않습니다.

Q6. 이 제품을 사람 외 pluripotent stem cell의 분화에 사용할 수 있나요?
다른 종의 stem cell로부터는 이 제품은 별도로 테스트된 바가 없습니다.

Q7. hPS cell 유래의 hepatocyte를 32일 이상 배양하면 어떻게 되나요? hepatocyte의 활성이나 morphology를 잃거나 죽나요?
Hepatocyte는 Cellartis^® Hepatocyte Maintenance Medium (Code Y30051)으로 10일까지 추가로 배양될 수 있습니다 (최대 42일). 42일 이후에는 hepatocyte의 활성을 잃고, culture vessel에서 떨어지며, 세포의 사멸이 시작되는 등의 문제가 발생합니다.

Q8. 이 제품으로 분화한 hepatocyte는 human primary hepatocyte와 비교해서 어떤 차이점이 있나요?
가장 큰 차이점은 primary hepatocyte는 배양 중 탈분화 과정으로 인해 빠르게 functionality가 감소하는 반면, 이 제품으로 제작된 hepatocyte는 수 주의 배양동안 functionality가 유지된다는 점입니다. 추가로 primary hepatocyte는 사람 간의 확연한 metabolic diversity로 인해 batch별로 donor variation이 있어 연구 중 다른 batch의 제품을 사용해야 하는 경우 문제가 발생할 수 있습니다. 이 제품으로 분화한 hepatocyte는 hepatocyte의 key function (e.g. LDL uptake 등)을 가지고 있으며, primary hepatocyte와 유사합니다. 더 자세한 정보는 당사의 tech note (영문)를 참고 부탁드립니다.

Q9. 몇 일차부터 hepatocyte를 실험에 사용할 수 있나요?
이 제품을 사용하는 경우, 21일차부터 hepatocyte로 분화가 되었다고 간주하고 있습니다 (21일 이후에도 hepatocyte는 계속 maturation이 진행됩니다.). Fetal marker인 AFP가 21~39일차에 점차적으로 감소하며, 21일차부터 (hiPSC에서 분화를 시작한 날짜 기준; DE 세포에서 분화를 시작한 경우 14일차와 동일) hepatocyte를 사용할 수 있다고 생각되고 있습니다. 다만, 목적하는 application과 maturity requirement에 따라 최적의 사용 일자는 조정될 수 있습니다.

Q10. 이 제품으로 분화된 hepatocyte는 어떤 특징이 있나요?
Cellartis^® Enhanced hiPS-HEP v2 Kit (Code Y10133)는 이 제품과 동일한 프로토콜로 제작된 세포이며, 이 제품으로 분화된 hepatocyte는 위 제품과 동일한 특징 (e.g. CYP 활성 등)을 가질 것으로 기대합니다. 더 자세한 정보는 당사의 tech note (영문)를 참고 부탁드립니다.

Q11. 이 제품으로 얼마나 많은 세포를 얻을 수 있나요?
대략 5 x 10⁶의 hepatocyte를 얻을 수 있습니다 (약 50 cm²의 confluent hepatocytes). 이는 96 well plate의 150 well과 같고, 24 well plate는 24 well과 같습니다.

Q12. 이 제품으로 hiPSC에서 분화된 hepatocyte는 adult hepatocyte의 marker를 발현하나요?
예. 이 제품으로 제작된 hiPSC 유래의 hepatocyte는 albumin, PXR, CYP1A3, CYP2C9, and CYP3A4등의 adult hepatocyte marker를 발현합니다.

Q13. CYP enzyme 활성은 어떤 방법으로 테스트되었나요?
Specific metabolite (acetaminophen (CYP1A), 4-OH-Diclofenac (CYP2C9), OH-Bufuralol (CYP2D6), 1-OH-Midazolam (CYP3A))의 발현을 확인하기 위해 Liquid chromatography/mass spectrometry (LC/MS)를 사용했습니다. 더 자세한 정보는 당사의 tech note (영문)를 참고 부탁드립니다.

Q14. hiPSC에서 분화된 hepatocyte는 drug metabolism 활성을 보이나요?
예. 이 제품으로 제작된 hiPSC 유래의 hepatocyte가 basal CYP enzyme 활성을 보이는 것을 LC/MS (CYP1A, CYP3A, CYP2C09, CYP2C19)로 확인했습니다.

Q15. 이 제품으로 hiPSC에서 분화된 hepatocyte는 모세담관 (bile canaliculi) 형태를 보이나요?
당사에서는 모세담관 (bile canaliculi)의 형성을 별도로 테스트 해 보지 않았습니다. 다만, 고객의 실험에서 이러한 적용성을 확인한 사례가 있습니다.

Q16. 이 제품으로 hiPSC에서 분화된 hepatocyte으로 CYP enzyme 활성 유도가 가능하나요?
예. 이 제품으로 제작된 hiPSC 유래의 hepatocyte는 몇 가지 주요한 CYP enzyme을 기본적인 수준으로 발현합니다. 다만, CYP 유도의 경우 낮은 수준으로만 관찰되었습니다.


Q1. Cellartis^® iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System (Code Y30055)은 어떻게 배송되나요?
이 제품의 구성품인 Cellartis^® DEF-CS 100 Culture System에 일부는 4℃ (냉장수송)로 배송되고 나머지는 드라이아이스와 함께 배송됩니다. 이외 구성품인 Cellartis^® Definitive Endoderm Differentiation Kit와 Cellartis^® Hepatocyte Differentiation Kit는 모두 드라이아이스와 함께 배송됩니다.

Q2. DE는 몇 passage까지 유지되나요? DE 세포는 확대배양할 수 있나요?
DE 세포는 proliferative capacity를 가지고 있다고 알려져 있습니다. 아래와 같이 2013년 DE 세포를 확대배양하고 foregut endoderm으로 분화시키는 프로토콜이 발표된 사례가 있습니다. (Hannan et al.). 다만, 당사에서는 별도로 당사 프로토콜을 사용해 제작된 DE 세포로 확대배양 가능 여부를 테스트 해 보지 않았으며, DE 세포의 유지 및 확대배양을 위한 배지 역시 판매하고 있지 않습니다.

Q3. Hepatocyte를 확대배양 할 수 있나요?
아니요. 이 제품을 사용해 제작된 hepatocyte는 완전히 분화가 끝난 세포이기 때문에 확대배양이 불가능합니다.

Q4. 어떤 culture vessel을 사용할 수 있나요?
DE 분화를 위해서는 culture flask를 사용하는 것을 가장 추천합니다. 이때, 더 작은 culture vessel이 필요한 경우 6-well plate를 추천합니다.
Hepatocyte 분화를 위해서는 24-well plate 혹은 96-well plate를 추천합니다. 이때, 더 큰 culture vessel이 필요한 경우에는 culture flask도 사용할 수 있습니다.

Q5. 실험 프로토콜에서 매일 배지 교환을 12~18시간 가량 delay 시키는 등의 일부 편차로 hepatocyte의 기능에 영향이 있을 수 있는 가장 중요한 step 은 무엇인가요?
분화 실험의 최대 효율을 위해서는 전체 프로토콜을 정확하게 준수해야 합니다. Hepatocyte 분화 프로토콜에서 가장 중요한 step은 당사의 Tips & Tricks 페이지를 참고 부탁드립니다.

Q6. Automated cell counter를 cell counting에 사용할 수 있나요?
동일한 배양 조건과 정확한 seeding density를 사용하는 것이 성공적인 실험을 위해 매우 중요합니다. 따라서 hiPSC를 DEF-CS로 접종할 때 정확하게 cell을 counting하는 것이 중요합니다 (정확한 내용은 당사의 Tips & Tricks 페이지를 참고 부탁드립니다). 이때, automated cell counter는 세팅에 따라 counting이 부정확한 경우가 있어 hemocytometer/Burker chamber를 사용하는 것을 추천합니다. Automated cell counter를 사용하는 경우 hemocytometer/Burker chamber를 control로 사용해 세팅을 조정하는 것을 추천합니다.

Q7. 3D에서 이 제품으로 Hepatocyte의 분화를 진행할 수 있나요?
아니요. 이 제품의 프로토콜과 배지는 2D에서의 분화에만 적용할 수 있습니다.

Q8. DE 세포를 dissociation 후 reseed할 수 있나요?
예. DE cell은 hepatocyte 분화를 시작하기 전에 dissociation 후 reseed를 할 수 있습니다.

Q9. DE 세포를 dissociation후 freeze 시킬 수 있나요?
예. 사용자 매뉴얼에서 DE 세포의 cryopreservation protocol을 확인할 수 있습니다.