• 다양한 gene editing tool의 유전자 삽입을 위한 donor template 합성
• 500bp ~ 5kb 까지의 single strand DNA (ssDNA) 합성 가능
• Cloning과 Gel selection 정제 과정이 없는 빠르고 쉬운 프로토콜
• Off target 최소화 - dsDNA donor template에 비하여 극도로 낮은 random한 off-target integration로 높은 Editing 효율
• 세포독성을 최소화하여, 세포 생존율 향상

제품설명

유전자 삽입을 위한 Donor repair template의 경우 double-stranded DNA (dsDNA)에 비하여 single-stranded DNA (ssDNA) repair template가 보다 많은 이점이 있다고 알려져 있지만, long ssDNA donor template의 합성과 비용의 문제가 있었다.
Guide-it™ Long ssDNA Production System v2는 다양한 gene editing tool을 이용한 knock-in 실험을 위한 최장 5kb의 ssDNA repair template oligonucleotide를 50회 합성할 수 있는 제품이다. 기존 제품에 비해 Strandase의 성능이 업그레이드 되었을 뿐 아니라, 최적의 buffer와 정제제품까지 포함하고 있다. 본 제품을 이용하면 Strandase를 처리하는 것만으로도 dsDNA PCR 산물을 sense 또는 antisense strand로 분리하여 ssDNA를 제작할 수 있다.

ssDNA donor template의 장점

• Significantly reduced random and off-target integration, resulting in improved gene editing efficiency and lower likelihood of experimental artefacts
• Minimal cytotoxicity, enabling recovery of larger populations of edited cells
• Negligible transgene expression from nonintegrated templates, allowing for easier identification of correctly edited clones

그림 1. Schematic describing the steps involved in the preparation of long ssDNA donors for use in HDR experiments.


그림 2. Guide-it Long ssDNA Production System v2를 이용해 개선된 ssDNA 합성 성능
dsDNA와 기존 제품으로 합성한 ssDNA와 전기영동으로 분석했을 때, 업그레이드된 Guide-it Long ssDNA Production System v2로 합성한 ssDNA에서 가장 선명한 밴드로 확인되었다.
Gel image showing the dsDNA starting material (Lane 1) and sense (SS) or antisense (AS) ssDNA products for several HDR templates generated using the original (v1) or updated (v2) versions of the Guide-it Long ssDNA Production System (Lane 2 and Lane 3, respectively). dsDNA templates included in this analysis had been identified as challenging substrates for ssDNA generation using the v1 Guide-it kit. The dsDNA and ssDNA were analyzed via agarose gel electrophoresis using ethidium bromide as a staining agent. ssDNA products run at a smaller molecular weight than corresponding dsDNA substrates. In all cases, the Guide-it Long ssDNA Production System v2 generated a cleaner band of ssDNA than the previous version of the kit, suggesting more complete and uniform digestion.

자세한 구성은 CoA를 참고하세요.