* CHOgro
® Expression Media, Dry Powder, Prepares 10 Liters의 최소 발주수량은 3개 이상이며, 납기까지 8~10주 소요됩니다.
** CHOgro
® Expression Media, 10 Liter Polybag의 최소 주문 수량은 10개 이상이며, 납기까지 8~10주 소요됩니다.
- Suspension CHO cell을 이용하여 높은 경제성으로 고수율 항체/단백질 발현 시스템
- 기존 제품 (Code MIR 6260)제품에 CHOgro® Titer Enhancer가 추가되어 단기간 내 고수율 항체/단백질 발현: Transfection 7일 후 고효율 항체/단백질 발현 가능
- 간편한 Protocol: Transfection 후 enhancer 첨가 및 온도 변경 외 추가 실험 과정이 없어, 오염 최소화
- Chemically defined, hydrolysate-free, animal origin-free medium
- 제품 공정 사용시 별도의 License 계약 필요없음
제품 설명
CHOgro® High Yield Expression System은 suspension CHO cell을 이용하여 대량의 단백질 발현에 최적화된 2세대 제품이다. 기존 CHOgro® Expression System (Code MIR 6260)에
CHOgro® Titer Enhancer가 추가되어, 상용화 제품 중 최고 수준으로 빠르고 높은 항체/단백질 발현을 실현하였다. Suspension CHO cell용 배양배지 및 첨가제, transfection 시약 등이 포함된 all-in-one system으로
높은 경제성으로 고수율 항체/단백질 생산이 가능하다.
본 제품에 포함된 모든 구성 요소는 동물 유래 성분이 포함되어 있지 않다. 또한 구성품 중 CHOgro® Titer Enhancer을 제외하면, 모두 개별로 구매가 가능하여 더욱 높은 경제성을 실현할 수 있다.
그림 1. CHOgro® High Yield Expression System을 이용한 항체 발현량 비교.
CHOgro® High Yield Expression System과 Expifectamine CHO Transfection Kit 항체 발현량을 동일한 기본구조의 vector를 이용하여 제작된 6종류의 IgG1 항체 발현 plasmid에서 비교하였다. CHOgro® High Yield Expression System은 CHOgro® Expression Medium에서 배양된 FreeStyle CHO-S cells에 1 ㎖당 1 ㎍의 plasmid를 TransIT®-Pro를 사용하여 transfection 하였다 (TransIT®-PRO 시약 : plasmid = 1:1, 세포 밀도 4×106 cells/㎖). CHO cell에 transfection complex를 첨가한 후, CHOgro® Titer Enhancer를 추가하고, 배양 온도를 37 ℃에서 32 ℃로 변경하여 배양하였다.
Expifectamine® CHO Transfection Kit는 ExpiCHO Expression Medium에서 배양된 ExpiCHO-S cells에 1 ㎖ 당 1 ㎍의 plasmid를 transfection하였다 (시약 : plasmid = 3.2 : 1, 세포 밀도 6×106 cells/㎖). ExpiCHO® Expression System의 Max titer protocol에 따라 24 시간 후에 Expifectamine® CHO Enhancer와 Feed를 첨가하여 배양 온도를 37 ℃에서 32 ℃로 변경하였고, 5 일째 ExpiCHO® Feed를 첨가하였다.
각각 배양에는 Thomson 사의 125 ㎖ 진탕 배양용 플라스크 (25 ㎖/병)를 사용하였고, 7일 및 14 일에 배양액 상청 중 항체 농도를 ELISA 법으로 측정하였다 (Error bars = n3) .
CHOgro® High Yield Expression System은 transfection 당일에 enhancer 첨가 및 배양 온도를 변화시키는 간단한 protocol로, 경쟁 제품 대비 단기간 (7일)/장기간 (14일) 배양 후 높은 항체 발현량을 실현하였다.
그림 2. CHOgro® Titer Enhancer로 인한 세포 성장 및 독성 변화 확인.
CHOgro® Expression Medium에 배양된 FreeStyle CHO-S cells에 TransIT®-PRO를 이용하여 1 ㎖ 당 1 ㎍의 plasmid를 transfection하였다 (TransIT®-PRO : DNA = 1 : 1, 세포 밀도 4×106 cells/㎖). CHO cell에 transfection complex를 첨가한 직후, CHOgro® Titer Enhancer를 추가하여, 배양 온도를 37 ℃에서 32 ℃로 변경 후 배양하였다. CHO cell배양은 Thomson사의 125 ㎖ 진탕 배양용 플라스크 (25 ㎖/병)을 사용하였다.
Transfection 후 7 일까지 flow cytometry로 세포 수 (실선) 및 생존율 (점선 : propidium iodide staining)을 측정하였다 (n=3). CHOgro® Titer Enhancer의 첨가로 인한 세포 증식 및 독성은 확인되지 않았다.
그림 3. CHOgro® Titer Enhancer 첨가로 인한 단백질 발현량 비교.
서로 다른 Fc 융합 단백질을 발현하는 2종류의 plasmid를 사용하여 일시적(transient)으로 단백질 발현을 실시했다. CHOgro® Expression Medium에서 배양된 FreeStyle CHO-S cells에 1 ㎖ 당 1 ㎍의 plasmid를 TransIT®-PRO를 이용하여 transfection하였다 (TransIT®-PRO : DNA = 1 : 1, 세포 밀도 4×106 cells/㎖). CHO cell에 transfection complex를 첨가한 직후 CHOgro® Titer Enhancer를 추가하여, 배양 온도를 37 ℃에서 32 ℃로 변경하고, 코팅하지 않은 6 well plate에서 CHO cell을 배양하였다 (2 ㎖/well). 배양 10일 후, 배양액 중 human IgG 농도를 ELISA로 측정하였다 (Error bars = n3). CHOgro® Titer Enhancer의 첨가에 의해 단백질 발현량이 30~60% 이상 상승되는 것을 확인하였다.
그림 4. CHOgro® Titer Enhancer 사용으로 증가된 역가 비교.
CHOgro® Expression Medium에서 배양된 CHO-S 세포에 1 ㎖ 당 1 ㎍의 Fc 융합 단백질 발현 plasmid를 TransIT®-PRO를 이용하여 transfection하였다 (TransIT®-PRO : DNA = 1 : 1). CHO cell에 transfection complex를 첨가 직후, CHOgro® Titer Enhancer를 추가하여 배양 온도를 37 ℃에서 32 ℃로 변경한 뒤, 0.5 L 스케일로 배양하였다. 배양 10일에 affinity chromatography로 단백질을 정제하여, CHOgro® Titer Enhancer 사용으로 인해 단백질 발현량이 증가하였음을 확인하였다.
(데이터 제공: Lytic Solutions, LLC)
그림 5. 기존의 Transfection 시약과 항체 발현량 비교.
CHOgro® High Yield Expression System (TransIT-PRO + CHOgro® Titer Enhancer)와 PEI 기반 A사 제품 (시약 : DNA = 4 : 1) 및 Linear PEI (25 kDa PEI : DNA = 6 : 1)을 이용하여, CHOgro® Expression Medium에서 배양된 FreeStyle FreeStyle CHO-S cells에 1 ㎖ 당 1 ㎍의 IgG 항체 발현 plasmid를 transfection하였다. CHO cell에 transfection complex를 첨가 직후 CHOgro® Titer Enhancer를 추가하여 배양 온도를 37 ℃에서 32 ℃로 변경한 뒤, 배양 14일의 배양액 중 human IgG 농도를 ELISA법으로 측정하여 비교하였다 (Error bars = n3). 그 결과, TransIT®-PRO와 CHOgro® Titer Enhancer를 사용하였을 때 가장 높은 항체 발현량을 확인하였다.
CHOgro® High Yield Expression System (Code MIR 6270) 구성
| 구성품 |
용량 |
별도구매 가능 |
TransIT-PRO® Transfection Reagent |
1 ㎖ |
MIR 5740 |
CHOgro® Titer Enhancer Medium |
20 ㎖ |
별도 구매 불가 |
CHOgro® Expression Medium |
2 × 1000 ㎖ |
MIR 6200 |
CHOgro® Complex Formation Solution |
100 ㎖ |
MIR 6210 |
Poloxamer 188 Solution |
100 ㎖ |
MIR 6230 |
L-Glutamine Solution |
100 ㎖ |
MIR 6240 |
CHOgro® Transfection and Titer Enhancer Kit (Code MIR 6225) 구성
| 구성품 |
용량 |
별도구매 가능 |
TransIT-PRO® Transfection Reagent |
1 ㎖ |
MIR 5740 |
CHOgro® Titer Enhancer Medium |
20 ㎖ |
별도 구매 불가 |
대용량 (10L) CHOgro® Expression Media
그림 6. 대량의 CHO cell 배양을 위한 대용량의 CHOgro® Expression Media.
Powder 형태 (좌), Polybag 형태 (우)
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