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High Fidelity PCR 효소의 기준

기본-HS DNA Polymerase

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	R010A	PrimeSTAR® HS DNA Polymerase	250 U	264,000원
Takara	R010B	PrimeSTAR® HS DNA Polymerase	1,000 U (R010A x 4)	848,000원

Product index

Overview
High fidelity PCR: PrimeST..
Standard PCR: Ex, LA, rTaq..
Direct PCR: MightyAmp
Dye가 포함된 premix
특수 PCR (Epigenetics, UNG..
PCR Enzyme (Clontech)
DNA PCR 관련 제품
RT-PCR 관련 제품
Mutagenesis
- Diversify PCR Random M..
PCR Subtraction 관련 제품
PCR 장치
- PCR 관련 소모품
- TaKaRa PCR Thermal Cyc..
PCR Accessory Products
- Advantage Ultrapure PC..
- TaqStart Antibody
Whole Genome SNP Detection
- TITANIUM DNA AMPLIFICA..
병원체ㆍ유전자 검출 (PCR)

제품설명

PrimeSTAR HS DNA Polymerase는 다카라바이오가 독자적으로 개발한 아주 높은 정확성과 뛰어난 증폭 효율을 겸비한 DNA polymerase이다. 본 효소는 매우 강력한 3' → 5' exonuclease 활성을 가져, PCR 증폭에 대해 강력한 Proofreading 기능을 나타내는 한편, Taq DNA Polymerase의 매우 뛰어난 증폭 효율도 나타낸다. 상온에서의 DNA Polymerase 활성 및 3' - 5' exonuclease 활성을 억제하는 monoclonal Ab를 첨가하고 있기 때문에, PCR 반응전의 miss-priming이나 primer의 digestion을 막을 수 있어 높은 반응 특이성을 얻을 수 있다. 또, 본 효소는 높은 priming 효율을 가지고 있기 때문에, annealing 시간을 짧게 설정할 수 있어 종래의 반응 시간을 단축할 수 있다. 게다가 고도로 최적화한 PrimeSTAR Buffer를 이용하는 것으로, 폭넓은 타겟에 대해 High Fidelity, 고감도, 고특이성, 높은 성공율로 증폭이 가능하다.

특징

GC rich인 Thermus thermophilus HB8 genomic DNA를 주형으로서 임의에 선택한 8 영역(증폭 사이즈는 각각 약 500 bp)을 PCR 증폭 후, 벡터에 클로닝 해, 각 배열에 대해 복수 클론을 픽업 해 그 순서를 확인하여, mutation frequency를 확인하였다.
그 결과 PrimeSTAR HS DNA Polymerase는 Taq DNA Polymerase와 비교해서 10배 Fidelity가 높고, A사 High Fidelity 효소에 비해도 동등 이상의 정확성을 나타냈다.
이 방법은, 실제의 PCR에 가장 적합한 Fidelity를 구하는 방법이며, 정확성이 중요한 반응에 안심하고 본효소를 사용할 수 있다.

내용(250U)

*PrimeSTAR HS DNA Polymerase(TaKaRa Code R010A/B)*
PrimeSTAR HS DNA Polymerase(2.5 U/㎕ )	100 ㎕
5 x PrimeSTAR Buffer(Mg²⁺Plus)	1 ml x 2
dNTP Mixture(2.5 mM)	800 ㎕
* Mg²⁺ 농도:5 mM（5×)

형태

50 mM		Tris-HCl（pH8.2 at 4℃）
100 mM		NaCI
0.1 mM		EDTA
1 mM		DTT
0.1 %		Tween 20
0.1 %		Nonidet P-40
50 %		Glycerol

활성의 정의

활성화 salmon sperm DNA를 Template/primer로 이용해 아래와 같은 활성 측정용 반응액 중에서 74℃에서 30분간 10 nmol의 nucleotides를 산불용성침전물로 전환시키는 활성을 1 U로 한다.

활성 측정용 반응액 조성

100 mM	Tris-HCl 완충액(pH8.3 at 37℃）
10 mM	KCl
6 mM	(NH₄)₂SO₄
2 mM	MgCl
0.1 %	Triton X-100
0.001％	BSA
각 200 μM	dATP·dGTP·dCTP
100 μM	[³H］TTP
0.4 mg/mll	활성화 salmon sperm DNA

PCR 산물

PrimeSTAR HS DNA polymerase를 이용해 증폭한 PCR 산물의 대부분은 blunt end다. 따라서, 그 PCR 산물을 그대로(필요에 따라서 인산화해) blunt end의 vector에 클로닝 하는 것이 가능하며, A-tailing 후에 T-vector에 cloning에 이용할 수 있다.

PCR 검정

- λDNA를 주형으로 한 PCR(증폭 산물 8, 10, 12, 15 kbp)에 대해 양호한 증폭을 볼 수 있는 것을 확인하고 있다.
- Human genome DNA를 주형으로 한 PCR(증폭 산물 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 kbp)에 대해 양호한 증폭을 볼 수 있는 것을 확인하고 있다

보존 -20℃

순도

- 10 U의 본 효소와 0.6 μg의 λ-Hind III 분해물을 74℃, 1시간 반응시켜도 DNA의 전기 영동 패턴에 변화는 일어나지 않는다.
- 10 U의 본 효소와 0.6 μg의 supercoiled pBR322 DNA를 74℃, 1시간 반응시켜도 DNA의 전기 영동 패턴에 변화는 일어나지 않는다.